離子交換高效液相色譜法分析HbA1c方法的建立
離子交換高效液相色譜法分析HbA1c
當(dāng)葡萄糖在βN-末端結(jié)合形成HbA1c時(shí)，血紅蛋白分子發(fā)生構(gòu)象變化，導(dǎo)致分子呈現(xiàn)額外的負(fù)電荷。這意味著在離子交換色譜系統(tǒng)中，它將從正常血紅蛋白（HbA0）和通常與HbA0共洗脫的賴氨酸側(cè)鏈糖基化的血紅蛋白中分離出來(lái)。
通過(guò)對(duì)色譜方法和儀器（HPLC）的改進(jìn)，血紅蛋白被常規(guī)分離成許多峰，如HbA1a，HbA1b，HbF（胎兒血紅蛋白），HbA1c，HbA0，HbA2和一些與其他分子反應(yīng)產(chǎn)生的血紅蛋白產(chǎn)物谷胱甘肽，尿素，阿司匹林等）。
還有一些血紅蛋白降解產(chǎn)物出現(xiàn)在已老化的樣品中。在一些HPLC系統(tǒng)中，這些可能與HbA1c共洗脫或不完全分離。在這些情況下，獲得的HbA1c值可能會(huì)高于實(shí)際值。新鮮血液樣品含有大量不穩(wěn)定的HbA1c，這些HbA1c在一些較早的分析儀中通過(guò)預(yù)孵育步驟被除去。較新的分析儀將不穩(wěn)定形式與穩(wěn)定的HbA1c分開，不需要預(yù)先孵育樣品。
使用離子交換HPLC的平臺(tái)包括BioRad D-10，Diastat，Variant，Variant II和Variant Turbo;?TOSOH 2.2 Plus，G7，G8，Menarini Arkray Adams HA 8160.HbA1c對(duì)照的完整性對(duì)于這些方法更為關(guān)鍵，因?yàn)槿魏谓到舛紩?huì)導(dǎo)致可能與HbA1c共洗脫（和共同整合）的干擾峰的增加。由于這個(gè)原因，對(duì)于這些方法可用的重構(gòu)或開瓶時(shí)間可能小于免疫測(cè)定程序。