使用Geneious快速定位基因魔剪CRISPR/cas的gRNA位點與脫靶結(jié)合位點[1]
基于機(jī)器學(xué)習(xí),僅供參考。
介紹
CRISPR / Cas9系統(tǒng)是用于基因編輯的RNA引導(dǎo)核酸內(nèi)切酶技術(shù)。該系統(tǒng)需要包含與PAM(Protospacer Adjacent Motif)位點相鄰的20bp靶序列的指導(dǎo)RNA(gRNA),以將Cas9核酸內(nèi)切酶引導(dǎo)至切割位點。Geneious中的Find CRISPR位點工具將搜索所選基因中的gRNA(“CRISPR”)位點,并在您感興趣的基因組中搜索脫靶結(jié)合位點。選定序列中的每個CRISPR位點根據(jù)它可能會綁定到多少個脫離目標(biāo)位點以及脫離目標(biāo)位點與原始序列的相似程度進(jìn)行評分。
在本教程中,您將使用來自釀酒酵母?S288c?的LYP1 CDS?和使用S288c基因組作為脫靶數(shù)據(jù)庫。LYP1或賴氨酸通透酶在酵母基因組的14號染色體上發(fā)現(xiàn)。它是負(fù)責(zé)攝取陽離子氨基酸的三種氨基酸通透酶之一(Alp1p,Can1p,Lyp1p)。有關(guān)此基因的更多信息,請點擊https://www.yeastgenome.org/。
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