小動物活體成像螢光素酶|D-熒光素鉀鹽發光底物
PerkinElmer訂貨號 122799
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請注意圖片上刊登的優惠價格因新的匯率上浮與懲罰性關稅導致成本上浮已失效2019.06.01
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PE 122799熒光素酶 D-熒光素鉀鹽發光物小動物活體成像專用金標準
螢火蟲D-熒光素對于進行生物發光分析至關重要，研究質量取決于熒光素的質量。無論是用于體外分析還是監測體內光度，PerkinElmer的高品質D-熒光素都以實惠的價格提供。
D-熒光素鉀鹽-小動物活體成像技術核心金標準試劑
D-熒光素是一種在生物細胞中發現的化學物質，可產生生物發光。當熒光素在螢火蟲熒光素酶和ATP的催化作用下被氧化時，產生光。熒光素能夠穿透細胞膜并且可以用于監測已被轉導以表達熒光素酶的體內感興趣細胞的活性。因為與熒光素酶的反應是ATP依賴性的，所以也可以確定細胞活性。
d熒光素生物發光底物已經在許多的被驗證體內使用PerkinElmer的IVIS生物光子成像應用?成像系統。
Molecular Information: C11H7KN2O3S2 (MW: 318.4)
規格
| 熒光素酶分類 | 來自螢火蟲 |
|---|---|
| 產品品牌名稱 | XenoLight |
| 包裝量 | 1G |
| 運輸條件 | 藍冰 |
| 產品規格 | 1克 |
熒光素對于進行生物發光測定至關重要 - 您的研究質量取決于你的熒光素質量。這就是為什么PerkinElmer在體內臨床前成像領域為世界領先者。PE以實惠的價格提供高品質Luciferin。
熒光素是一種在各種細胞中發現的化學物質 生物發光生物。當Luciferin被氧化時熒光素酶和ATP的催化作用產生光。 因為反應依賴于ATP，所以它允許研究人員確定能量或生命的存在。螢火蟲熒光素是體外生物光子的特別好的試劑，由于其發射光譜的特性而成像。
XenoLight D-Luciferin K + Salt優化用于體內成像。優化的D-熒光素，僅供研究使用。不用于診斷過程。 熒光素可以多種方式使用。它可以用于各種體外試驗，其中 可以用發光計或閃爍計數器監測光的產生。 它還可用于監測體內光產生，并可使用PerkinElmer的IVIS?進行監測成像平臺。因為熒光素可以穿透細胞膜，它可以使轉化的細胞成為細胞膜監測熒光素酶活性。 Luciferin也可與PerkinElmer的Bioware?Brite熒光素酶一起使用表達腫瘤細胞系和我們的Red-FLuc慢病毒顆粒。
選擇熒光素底物時需要考慮很多因素，了解您很重要 正在使用最高質量的熒光素進行實驗。
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Protocol 1#確定熒光素動力學曲線模型步驟
一、生成模型中熒光素酶活性的動力學曲線
1.通過腹膜內（i.p.）途徑用15mg / ml或30mg / ml的溶液將熒光素注射入動物體內， 溶于PBS，工作劑量為150 mg / kg。*
2.等待三分鐘，用你選擇的方法鎮靜動物;氣體或注射麻醉。 （2％ 異氟醚氣體麻醉可使健康動物在IVIS中安全鎮靜45分鐘。）
3.將鎮靜的動物放入成像室并拍攝第一張圖像，現在大約為5張 在Luciferin注射后幾分鐘。
4.每隔5-10分鐘繼續拍攝圖像，最多約40分鐘。這將表明動力學 模型中熒光素攝取的曲線。
5.一旦建立了曲線，就可以按照右側的成像程序進行操作 此后成像的最佳時間點。 （Luciferin注射后10-20分鐘對大多數人來說是理想的 楷模。）
6.每隔10分鐘，最多40分鐘，使用IVIS成像系統檢查體外生物發光 確定動力學曲線并找出每種細胞類型的峰值成像時間點。
二、使用PerkinElmerIVIS?體內成像系統
1.將熒光素注入動物體內。用15mg / ml或30mg / ml的溶液溶解在PBS中，進行加工劑量為150毫克/千克。*
2.根據動力學曲線確定允許在動物中分配最佳時間。
3.將鼠放入透明的有機玻璃麻醉盒（2.5-3.5％異氟醚）中，使視覺暢通無阻監測動物;例如人們可以很容易地確定動物是否在呼吸。 向盒子提供麻醉的管子被分開，以便麻醉的濃度相同輸送到位于成像室內的麻醉歧管。
4.一旦麻醉完全發揮作用，將鼠從盒子轉移到附著的鼻錐上成像室內的歧管。關上門然后點擊Living中的“獲取”按鈕計算機屏幕上的圖像程序。成像時間為每個位置1至5分鐘（背/腹），取決于實驗，每個位置的5分鐘數是最大值。當將鼠從背部轉向腹部（反之亦然）時，可以檢查它是否有任何窘迫的跡象或生命力的變化。成像過程完成后，將鼠放回籠中，快速喚醒。
*注意：許多人喜歡注入清醒的動物。注射前鎮靜鼠是可以接受的，但是這樣做可能會略微延長動力學（峰值熒光素酶表達時間）。
Protocol 2#用于體外生物發光測定的熒光素的制備
Preparation of Luciferin for In Vitro Bioluminescent Assays
一、實驗材料準備和執行步驟
實驗材料準備
?D-Luciferin螢光素鉀鹽，1.0克/瓶（PerkinElmer訂貨＃122799）
?無菌水
?完整的媒介
應將細胞接種于平板中過夜或測定前數小時，以使細胞附著于細胞 底部?？梢詫腋〖毎到臃N在平板中的工作溶液中以進行直接培養成像。
如果倍增時間相對較短，則應考慮倍增時間進行細胞計數。
執行步驟
1.在無菌水中制備200X熒光素儲備液（30 mg / ml）。注意：人們可以重建 將全部1.0克D-熒光素在33.3毫升無菌水中制成30毫克/毫升（200倍）的原液，或重建個體實驗所需的D-熒光素的量。
2.通過倒置輕輕混合，直至熒光素完全溶解。*
3.在預熱的組織培養基中制備150μg/ ml的D-熒光素工作溶液。 快速解凍200X熒光素的儲備溶液，并在完全培養基中稀釋1：200（最終150μg/ ml）濃度）。
4.從培養的細胞中吸出培養基。
5.在成像前將1x熒光素溶液加入細胞中。注意：將細胞在37°C下短時間孵育在成像之前可以增加信號。孵育時間取決于特定的細胞類型。一般來說孵育10分鐘就足夠了;根據需要進行測試和調整。
6.每隔10分鐘，最多40分鐘，使用IVIS成像系統檢查體外生物發光確定動力學曲線并找出每種細胞類型的峰值成像時間點。
一、實驗材料準備和執行步驟
實驗材料準備
?D-Luciferin，螢火蟲，鉀鹽，1.0克/瓶（PerkinElmer訂貨＃122799）
?DPBS，不含Mg2 +和Ca2 +
?注射器過濾器，0.2μm
執行步驟
1.在DPBS中制備15mg / ml新鮮的Luciferin原液。*
2.通過0.2μm過濾器過濾滅菌。
3.確定10μL/ g體重的注射量。每只小鼠應接受150毫克熒光素/千克 體重。 （例如，對于10g小鼠，注射100μL以遞送1.5mg熒光素）
4.在體內成像前10-15分鐘腹膜內（i.p.）注射熒光素，或由 動力學曲線。**
*強烈建議在稀釋后立即使用工作溶液。必要時溶解螢光素 可在4°C下儲存長達3周;但是，在4°C或-20°C下長時間存放可能會導致信號退化。
**應對每個新動物模型進行熒光素動力學曲線以確定峰值信號時間。
請參閱我們的'確定您的模型的熒光素動力學曲線'說明書 在我們的網站上下載。
注意：熒光素是一種光敏試劑，應盡可能避免直射光。我們 建議保護熒光素免受光照（例如用光阻材料如錫覆蓋）
在整個測定過程中，從原液制備到程序完成。