小動物活體成像螢光素酶|D-熒光素鉀鹽發(fā)光底物
PerkinElmer訂貨號 122799
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PE 122799熒光素酶 D-熒光素鉀鹽發(fā)光物小動物活體成像專用金標準
螢火蟲D-熒光素對于進行生物發(fā)光分析至關重要，研究質量取決于熒光素的質量。無論是用于體外分析還是監(jiān)測體內光度，PerkinElmer的高品質D-熒光素都以實惠的價格提供。
D-熒光素鉀鹽-小動物活體成像技術核心金標準試劑
D-熒光素是一種在生物細胞中發(fā)現(xiàn)的化學物質，可產(chǎn)生生物發(fā)光。當熒光素在螢火蟲熒光素酶和ATP的催化作用下被氧化時，產(chǎn)生光。熒光素能夠穿透細胞膜并且可以用于監(jiān)測已被轉導以表達熒光素酶的體內感興趣細胞的活性。因為與熒光素酶的反應是ATP依賴性的，所以也可以確定細胞活性。
d熒光素生物發(fā)光底物已經(jīng)在許多的被驗證體內使用PerkinElmer的IVIS生物光子成像應用?成像系統(tǒng)。
Molecular Information: C11H7KN2O3S2 (MW: 318.4)
規(guī)格
| 熒光素酶分類 | 來自螢火蟲 |
|---|---|
| 產(chǎn)品品牌名稱 | XenoLight |
| 包裝量 | 1G |
| 運輸條件 | 藍冰 |
| 產(chǎn)品規(guī)格 | 1克 |
熒光素對于進行生物發(fā)光測定至關重要 - 您的研究質量取決于你的熒光素質量。這就是為什么PerkinElmer在體內臨床前成像領域為世界領先者。PE以實惠的價格提供高品質Luciferin。
熒光素是一種在各種細胞中發(fā)現(xiàn)的化學物質 生物發(fā)光生物。當Luciferin被氧化時熒光素酶和ATP的催化作用產(chǎn)生光。 因為反應依賴于ATP，所以它允許研究人員確定能量或生命的存在。螢火蟲熒光素是體外生物光子的特別好的試劑，由于其發(fā)射光譜的特性而成像。
XenoLight D-Luciferin K + Salt優(yōu)化用于體內成像。優(yōu)化的D-熒光素，僅供研究使用。不用于診斷過程。 熒光素可以多種方式使用。它可以用于各種體外試驗，其中 可以用發(fā)光計或閃爍計數(shù)器監(jiān)測光的產(chǎn)生。 它還可用于監(jiān)測體內光產(chǎn)生，并可使用PerkinElmer的IVIS?進行監(jiān)測成像平臺。因為熒光素可以穿透細胞膜，它可以使轉化的細胞成為細胞膜監(jiān)測熒光素酶活性。 Luciferin也可與PerkinElmer的Bioware?Brite熒光素酶一起使用表達腫瘤細胞系和我們的Red-FLuc慢病毒顆粒。
選擇熒光素底物時需要考慮很多因素，了解您很重要 正在使用最高質量的熒光素進行實驗。
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Protocol 1#確定熒光素動力學曲線模型步驟
一、生成模型中熒光素酶活性的動力學曲線
1.通過腹膜內（i.p.）途徑用15mg / ml或30mg / ml的溶液將熒光素注射入動物體內， 溶于PBS，工作劑量為150 mg / kg。*
2.等待三分鐘，用你選擇的方法鎮(zhèn)靜動物;氣體或注射麻醉。 （2％ 異氟醚氣體麻醉可使健康動物在IVIS中安全鎮(zhèn)靜45分鐘。）
3.將鎮(zhèn)靜的動物放入成像室并拍攝第一張圖像，現(xiàn)在大約為5張 在Luciferin注射后幾分鐘。
4.每隔5-10分鐘繼續(xù)拍攝圖像，最多約40分鐘。這將表明動力學 模型中熒光素攝取的曲線。
5.一旦建立了曲線，就可以按照右側的成像程序進行操作 此后成像的最佳時間點。 （Luciferin注射后10-20分鐘對大多數(shù)人來說是理想的 楷模。）
6.每隔10分鐘，最多40分鐘，使用IVIS成像系統(tǒng)檢查體外生物發(fā)光 確定動力學曲線并找出每種細胞類型的峰值成像時間點。
二、使用PerkinElmerIVIS?體內成像系統(tǒng)
1.將熒光素注入動物體內。用15mg / ml或30mg / ml的溶液溶解在PBS中，進行加工劑量為150毫克/千克。*
2.根據(jù)動力學曲線確定允許在動物中分配最佳時間。
3.將鼠放入透明的有機玻璃麻醉盒（2.5-3.5％異氟醚）中，使視覺暢通無阻監(jiān)測動物;例如人們可以很容易地確定動物是否在呼吸。 向盒子提供麻醉的管子被分開，以便麻醉的濃度相同輸送到位于成像室內的麻醉歧管。
4.一旦麻醉完全發(fā)揮作用，將鼠從盒子轉移到附著的鼻錐上成像室內的歧管。關上門然后點擊Living中的“獲取”按鈕計算機屏幕上的圖像程序。成像時間為每個位置1至5分鐘（背/腹），取決于實驗，每個位置的5分鐘數(shù)是最大值。當將鼠從背部轉向腹部（反之亦然）時，可以檢查它是否有任何窘迫的跡象或生命力的變化。成像過程完成后，將鼠放回籠中，快速喚醒。
*注意：許多人喜歡注入清醒的動物。注射前鎮(zhèn)靜鼠是可以接受的，但是這樣做可能會略微延長動力學（峰值熒光素酶表達時間）。
Protocol 2#用于體外生物發(fā)光測定的熒光素的制備
Preparation of Luciferin for In Vitro Bioluminescent Assays
一、實驗材料準備和執(zhí)行步驟
實驗材料準備
?D-Luciferin螢光素鉀鹽，1.0克/瓶（PerkinElmer訂貨＃122799）
?無菌水
?完整的媒介
應將細胞接種于平板中過夜或測定前數(shù)小時，以使細胞附著于細胞 底部。可以將懸浮細胞系接種在平板中的工作溶液中以進行直接培養(yǎng)成像。
如果倍增時間相對較短，則應考慮倍增時間進行細胞計數(shù)。
執(zhí)行步驟
1.在無菌水中制備200X熒光素儲備液（30 mg / ml）。注意：人們可以重建 將全部1.0克D-熒光素在33.3毫升無菌水中制成30毫克/毫升（200倍）的原液，或重建個體實驗所需的D-熒光素的量。
2.通過倒置輕輕混合，直至熒光素完全溶解。*
3.在預熱的組織培養(yǎng)基中制備150μg/ ml的D-熒光素工作溶液。 快速解凍200X熒光素的儲備溶液，并在完全培養(yǎng)基中稀釋1：200（最終150μg/ ml）濃度）。
4.從培養(yǎng)的細胞中吸出培養(yǎng)基。
5.在成像前將1x熒光素溶液加入細胞中。注意：將細胞在37°C下短時間孵育在成像之前可以增加信號。孵育時間取決于特定的細胞類型。一般來說孵育10分鐘就足夠了;根據(jù)需要進行測試和調整。
6.每隔10分鐘，最多40分鐘，使用IVIS成像系統(tǒng)檢查體外生物發(fā)光確定動力學曲線并找出每種細胞類型的峰值成像時間點。
一、實驗材料準備和執(zhí)行步驟
實驗材料準備
?D-Luciferin，螢火蟲，鉀鹽，1.0克/瓶（PerkinElmer訂貨＃122799）
?DPBS，不含Mg2 +和Ca2 +
?注射器過濾器，0.2μm
執(zhí)行步驟
1.在DPBS中制備15mg / ml新鮮的Luciferin原液。*
2.通過0.2μm過濾器過濾滅菌。
3.確定10μL/ g體重的注射量。每只小鼠應接受150毫克熒光素/千克 體重。 （例如，對于10g小鼠，注射100μL以遞送1.5mg熒光素）
4.在體內成像前10-15分鐘腹膜內（i.p.）注射熒光素，或由 動力學曲線。**
*強烈建議在稀釋后立即使用工作溶液。必要時溶解螢光素 可在4°C下儲存長達3周;但是，在4°C或-20°C下長時間存放可能會導致信號退化。
**應對每個新動物模型進行熒光素動力學曲線以確定峰值信號時間。
請參閱我們的'確定您的模型的熒光素動力學曲線'說明書 在我們的網(wǎng)站上下載。
注意：熒光素是一種光敏試劑，應盡可能避免直射光。我們 建議保護熒光素免受光照（例如用光阻材料如錫覆蓋）
在整個測定過程中，從原液制備到程序完成。